催吐蘿芙木脂溶性生物堿提取工藝研究

　　1、材料

　　催吐蘿芙木干根（海南省五指山市海南制藥廠提供）。冰醋酸、醋酸酐、高氯酸、硫酸銀、氯化鋇、雷氏銨鹽等均為分析純，95%的酒精為工業(yè)級。

　　BT244S型電子天平（德國Sartorius）；RE-52-CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；DZF-6020型真空干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）。

　　2、方法與結(jié)果

　　2.1 蘿芙木生物堿的提取催吐蘿芙木干根經(jīng)粉碎，過40目篩后真空干燥�？紤]到不破壞蘿芙木提取物的生物活性，本實(shí)驗(yàn)在溫水浴條件下采用工業(yè)酒精浸漬法。提取液經(jīng)減壓濃縮，回收乙醇得浸膏。

　　2.2 水溶性生物堿含量的測定雷氏銨鹽在酸性介質(zhì)中可與大部分的生物堿生成沉淀。因此本試驗(yàn)將提取物用稀酸水溶解并調(diào)pH=2，加入新鮮配制的雷氏銨鹽飽和水溶液，濾出生成的生物堿雷氏鹽沉淀，用少量冰水洗滌1～2次，抽干。將沉淀溶于丙酮，濾除不溶物，再向生物堿雷氏鹽丙酮溶液中加入硫酸銀飽和水溶液，使生物堿雷氏鹽分解，生成生物堿硫酸鹽和雷氏銀鹽沉淀，過濾后再向?yàn)V液中加入計(jì)算量的氯化鋇溶液，生成生物堿鹽酸鹽和硫酸鋇沉淀，過濾，濾液蒸干得生物堿鹽酸鹽，稱重。蘿芙木生物堿的藥用形式多為水溶性鹽［7］，因此本實(shí)驗(yàn)以沉淀法得到的鹽酸鹽的量作為提取物中水溶性生物堿的量。

　　2.3 統(tǒng)計(jì)分析采用SAS（STATISTICAL ANALYSIS SYSTEM）8.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以GLM過程做總模型方差分析，從而選擇較優(yōu)提取條件。

　　2.4 提取條件的優(yōu)選 稱取催吐蘿芙木粗粉20 g，根據(jù)影響溶劑提取的主要因素，選擇溶劑用量（A）、提取時間（B）、提取溶液的pH條件（D）作為考察因素，每個因素根據(jù)實(shí)際情況取3個水平，按L9（34）表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，分別按“2.1項(xiàng)”下所述方法制得浸膏。以提取物中的生物堿鹽酸鹽為指標(biāo)，采用SAS 8.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。正交實(shí)驗(yàn)表頭設(shè)計(jì)見表1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果及處理數(shù)據(jù)見表2～3。

　　正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)方差分析，各提取因素對提取效果均有顯著影響，其中pH條件影響較顯著，提取時間和溶劑用量次之。分別對各因素不同水平做差異顯著性分析，可知A2與A3，C2與C3皆無顯著性差異，其余兩兩之間差異顯著。根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合大生產(chǎn)可能性，并從降低成本角度考慮，最終確定提取工藝為A2B1D1，即藥材粉碎成細(xì)粉，加10倍量95%的工業(yè)酒精在pH為2的條件下，浸提5 h。經(jīng)過濾，濃縮，回收乙醇，制得浸膏。

　　2.5 最佳工藝條件的驗(yàn)證以正交實(shí)驗(yàn)的最佳工藝參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果如表4�？芍�，應(yīng)用優(yōu)化后的工藝進(jìn)行提取試驗(yàn)，每100 g生藥提取后能制得12.8 g水溶性生物堿鹽酸鹽。3次所得提取物中生物堿鹽酸鹽的量基本平行，說明此工藝條件重復(fù)性好。傳統(tǒng)的醇提工藝大多直接以工業(yè)酒精浸漬3～7 d，優(yōu)化后的提取工藝只需5 h，生物堿鹽酸鹽的提取率可達(dá)12.8%。

　　3、結(jié)果

　　催吐蘿芙木中的脂溶性生物堿進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)了一系列的單萜吲哚類生物堿［2～5］。催吐蘿芙木原產(chǎn)于西非加納，是蘿芙木中的優(yōu)良品種，其干燥根及莖是我國重要的南藥，具有清風(fēng)熱、降肝火、消腫解毒的作用，是降壓藥利血平的主要天然來源［6］。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，提取溶劑的pH條件對提取水溶性生物堿影響最大，提取時間次之，溶劑用量影響最小。在A3B1D1條件下，溶劑用量稍大，成本過高，故選擇A2B1D1為最佳提取工藝條件。

　　本實(shí)驗(yàn)旨在優(yōu)化水溶性生物堿的提取工藝，首次采用雷氏銨鹽沉淀法從催吐蘿芙木浸膏中獲得生物堿鹽酸鹽。由于蘿芙木生物堿的藥用形式多為水溶性鹽，因此以沉淀法得到的鹽酸鹽作為考察指標(biāo)，具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。傳統(tǒng)的醇提工藝大多直接以工業(yè)酒精浸漬3～7 d，而在本工藝條件下，通過調(diào)節(jié)工業(yè)酒精的pH值，加入酸作為浸提輔助劑，提高了浸提效能，大大地縮短了浸提時間。