關于實驗微生物接種技術

　　一、目的：

　　學習微生物工作的基本接種方法，建立純培養技術中的“無菌”概念，掌握無菌操作技術。

　　二、原理：

　　所謂接種就是將一定量的純種微生物在無菌操作條件下轉移到另一已滅菌，并適宜于該菌生長繁殖所需的培養基上的過程。本實驗要求嚴格進行無菌操作，一般是在無菌操作臺或在實驗室內火焰旁進行。根據不同的實驗目的和培養方式，可以采用不同的接種工具和接種方法。

　　三、實驗材料：

　　斜面培養基、液體培養基、平板培養基、記號筆、酒精燈、接種針、消毒酒精、涂布棒等。

　　四、操作步驟

　　（一）無菌操作

　　菌種分離或移接工作應在無菌環境中進行，接種室、接種箱或超凈工作臺是常用的接種環境。用前先清潔好衛生，再進行消毒處理。可用紫外線燈和甲醛熏蒸的雙重作用，或用3%來蘇爾及其他表面消毒進行噴霧。

　　操作者的手應先用肥皂洗凈，再用酒精棉球消毒；整個操作過程都要靠近酒精燈火焰；接種工具在用前和用后必須在燈焰上滅菌；棉塞不得亂放，操作中只能夾在手上；不能有跑、跳等力度大的動作，以免引起空氣大振動而增加染菌機會。

　　（二）接種方法

　　（1）斜面接種：

　　從已長好微生物的菌種管移接到另一斜面管的方法。此法用于好氣性微生物的接種。

　　左手持菌種管和斜面管，使斜面向上，并盡量放平。用右手先將棉塞擰轉松動，再拿接種環，用右手的小指、無名指和手掌撥下棉塞并夾緊，同時將管口在火焰上燃燒一圈，接種環灼燒滅菌后插入管內，冷卻、挑菌，立即轉入斜面管底部，沿斜面劃曲線或直線。

　　（2）液體接種：

　　由斜面菌接種到液體培養基（如試管或三角瓶等）中的方法。

　　操作與上法基本一致，只是在將接種環送入液體培養基中時使環在液體與管壁接觸的地方輕輕磨擦，使菌體分散，然后塞上棉塞，再輕輕搖動均勻，即可培養。如果菌種是培養在液體培養基中時，一般用移液管或滴管接種。

　　（3）穿刺接種：

　　用接種針挑取菌種后，插入深層固體培養基內，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厭氣性細菌接種、檢查細菌的運動能力。

　　（4）平板接種：

　　將菌種接至培養皿的方法，平板接種的目的是觀察菌落形態、分離純化菌種，活菌計數以及在平板上進行各種試驗時采用的一種接種方法，可分為下面幾種：

　　1)斜面接平板

　　a.劃線法：見平板劃線分離法。

　　b.點種法：一般用于觀察霉菌和酵母細胞，輕輕點在平板的表面（根霉點一點，曲霉、酵母可點3-4點）即可。

　　2)平板接斜面：一般是將經平板分散培養得到的單菌落接種到斜面，以便作鑒定或擴大培養、保存之用。

　　五、思考題

　　1．何謂無菌操作？接種前應作哪些準備工作？

　　2．總結幾種接種方法的要點及應注意的事項？

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