高二生物微生物的實驗室培養的知識點歸納整理

　　一、配制時的質量控制

　　(1)容器：配制和分裝培養基的燒瓶、平皿或試管等器材應為中性，無酸、堿抑制物殘留，平皿底部要平，以免瓊脂厚薄不一，影響藥敏試驗結果。

　　(2)成分來源：各種成分來源可靠，不含對目的菌生長有抑制的物質。特殊要求的培養基，如葡萄糖氧化發酵試驗(O/F 試驗)，除加入葡萄糖外，不能含有其他糖類，指示劑不能用乙醇溶液，避免O/F試驗的假陽性。培養基配制用水應是蒸餾水。

　　(3)pH值調整：根據培養基的不同要求調整pH 值，控制在要求范圍的±0.2之內。應當注意，培養基在高壓滅菌后其pH 值降低0.1～0.2，故矯正時應比實際需要p H值高0.1～0.2。

　　(4)滅菌：根據培養基所含成分及配制數量的不同，選擇不同的滅菌方式，既要達到滅菌效果，又不破壞培養基成分。一般對穩定的培養基，如MH瓊脂、營養瓊脂可用高壓滅菌，即121℃15min ;而含糖的培養基則以108℃滅菌為好，以防止糖類破壞。不耐高熱的物質如血清、牛乳等，可采用間隙滅菌法滅菌。

　　(5)分裝：根據使用的目的和要求決定分裝量。分裝培養基所用的平皿、試管要求清潔，不殘留酸堿;制備平板培養基時，操作臺要水平，以避免瓊脂平板厚薄不一，同時確保無菌操作。

　　二、配制后質量控制

　　(1)培養基外觀情況：包括顏色、透明度、有無沉淀和凝固。如發現培養基表面有裂紋或與培養皿的邊緣分離，說明培養基有脫水現象，必須丟棄。

　　(2)無菌試驗：每一批配好的培養基均須進行無菌試驗。先滅菌后分裝的培養基，可采用抽樣方法試驗，少于100個樣本通常選取5%～10%的量，如果配制大量培養基，則任意選取10 個培養基;無菌分裝培養基則需全部做無菌試驗。樣本在35 ℃ 或其他適宜的溫度下隔夜培養，如培養基含有血液，則需再置于室溫1天，以檢查嗜冷菌。選擇性培養基因含有抑制物質，能抑制許多微生物，因此，可加入10倍量的無菌液體培養基，稀釋抑制物質，以利于檢出污染菌。即使做過無菌試驗，接種時，也要檢查每個平板上的可見菌落。

　　(3)性能測試：每一批新制或新購的培養基，使用前均須取已知性質的庫存菌種進行性能測試。培養基按目的不同可分為增菌培養基、分離培養基和鑒定培養基。

　�、僭鼍�培養基：接種少量難以生長的細菌，在一定時間內觀察增菌情況，細菌能生長的最小接種濃度越小，說明增菌培養基性能愈好。

　�、诜蛛x培養基：要求目的菌生長良好，非目的菌被抑制。一般要求生長的目的菌接種量不可過多，較好的方法是將測試菌調成0.5麥氏濁度的菌懸液，再用0.001ml的標準接種環涂劃在培養基上，觀察菌落生長。

　�、坭b定培養基：應選擇具有典型特征的菌株作性能試驗。如三糖鐵瓊脂，須用弗勞地枸櫞酸桿菌、福氏志賀菌及銅綠假單胞菌3種菌分別接種3支培養基，若反應結果為斜面產酸/高層產酸、硫化氫陽性，斜面產堿/高層產酸，斜面產堿/高層產堿，質量才算合格。

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