醫(yī)學(xué)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)

　　移液管的使用：吸—擦—調(diào)—放量取4.5毫升液體用什么移液管：應(yīng)該用10ml吸量管（注意看書p5下方吸量管的種類和使用）

　　微量加樣器的使用：裝吸液頭之后扭一下，保證不漏氣，吸液到第一停止點(diǎn)，緩慢釋放按鈕，停留1s，滑出，擦去吸液頭外面的液體，不擦尖端。放液先到第一停止點(diǎn)，停1s，到第二停止點(diǎn)，放液要貼壁，也是滑出。

　　分光光度法的原理：Lambert-Beer定律光吸收和什么因素有關(guān)A=-lgT直接比較法（公式法）、標(biāo)準(zhǔn)曲線法。標(biāo)準(zhǔn)曲線法A為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，取直線部分作定量依據(jù)。

　　凝膠層析：分子量大的先出，考了一道給了四種蛋白質(zhì)的分子量，問(wèn)哪個(gè)先出的。還考了一道分離不同分子量的蛋白質(zhì)用什么層析的。（親和層析、薄層層析的原理最好也看看吧）

　　離子交換層析：和后邊的血清γ球蛋白的實(shí)驗(yàn)一起考了好幾道題，等電點(diǎn)的概念還有離子交換層析的原理一定要清楚，題目會(huì)變換一下流動(dòng)相的ph什么的來(lái)考。咱們實(shí)驗(yàn)用的是DEAE—纖維素陰離子交換劑，具有堿性基團(tuán)，和流動(dòng)相中的陰離子進(jìn)行交換。

　　離心機(jī)的使用：尤其注意平衡哦~根據(jù)轉(zhuǎn)速的離心機(jī)的分類低速<6000r/min<高速<25000r/min<超速

　　各種離心方法：差速離心、密度梯度離心（速度區(qū)帶離心、等密度離心）、超速離心，要知道各種離心方法適用于分離什么。

　　光學(xué)顯微鏡的操作：左眼觀察右眼看圖，左手調(diào)焦右手移片或繪圖。低倍鏡轉(zhuǎn)到高倍鏡需要光圈調(diào)大。油鏡也出了一個(gè)選項(xiàng)，可以瞅一眼。

　　蟾蜍軟骨細(xì)胞中性紅染色：淡紅色的是細(xì)胞核和核仁，玫瑰紅色的是高爾基液泡。

　　大蒜根尖用鹽酸水解之后為什么要用蒸餾水洗3s

　　亞細(xì)胞組分沉降的先后：最先離心出的是細(xì)胞核，然后是線粒體，最終上清中是微粒體。沉降速度：細(xì)胞核>線粒體>微粒體。細(xì)胞核用甲基綠—派洛寧染色，甲基綠染的是DNA，綠色，派洛寧染RNA，紅色。為什么用冷玻片？細(xì)胞核過(guò)酒精是密度由高到低，每次5min。在丙酮中分色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)？詹納斯綠B染線粒體，綠色。

　　永久制片觀察：鐵蘇木精染線粒體：藍(lán)色。鍍銀染色：高爾基體，網(wǎng)狀，深棕色。考馬斯亮藍(lán)染微絲束，藍(lán)色。DNA的特異顯示方法（feulgen反應(yīng)）：60°C鹽酸水解使醛基暴露，和Schiff氏試劑（無(wú)色亞硫酸品紅）反應(yīng)成紫紅色化合物。考了一道為什么和希夫試劑反應(yīng)要放在抽屜里，避光防止變質(zhì)。胞質(zhì)被亮綠染成綠色。

　　乳酸脫氫酶在細(xì)胞中的定位分析：乳酸脫氫酶催化乳酸脫氫，傳遞給NAD+,顯色的是四唑鹽被還原成的雙甲臜藍(lán)紫色沉淀。

　　糖原同樣是希夫試劑和游離醛基反應(yīng)，成為PAS反應(yīng)。蘇丹黑染脂類為黑色。

　　蛋白質(zhì)含量的folin—酚法測(cè)定：酪氨酸帶有酚基，堿性條件下與銅離子螯合，使磷鉬酸—磷鎢酸還原生成藍(lán)紫色化合物，深淺可用分光光度法測(cè)，與蛋白質(zhì)含量成正比。（考了銅離子和氧化還原反應(yīng)、空白對(duì)照管）

　　血清γ球蛋白：前一部分初步分離是設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)哦~要提前自己設(shè)計(jì)，寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，實(shí)驗(yàn)之后再寫一份~考了好幾道離子交換柱層析的，改流動(dòng)相的ph先流出的是哪個(gè)蛋白啊，

　　DEAE—纖維素的處理啊，層析的步驟順序啊，還有用20%磺基水楊酸檢驗(yàn)蛋白質(zhì)。SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳考了SDS作用、β巰基乙醇的作用、催化劑和引發(fā)劑、上下各是正負(fù)極、顯色、濃縮膠和分離膠的上下和緩沖液的ph、濃縮膠的作用、分離膠的作用（分

　　子篩）、氯離子蛋白質(zhì)甘氨酸的遷移率、垂直板不連續(xù)電泳。染色用的是考馬斯亮藍(lán)，指示劑用的是溴酚藍(lán)。這個(gè)實(shí)驗(yàn)考了好多啊，好好看啊~！

　　血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定：血清提供的是酶（不是底物不是產(chǎn)物哦~）、丙酮酸和2,4—二硝基苯肼在堿性條件下生成棕色的丙酮酸二硝基苯腙、活性單位是每毫升血清在ph=7.4,37°C保溫30min每生成2.5μg丙酮酸作為一個(gè)酶活性單位。520nm比色。

　　唾液淀粉酶透析之后活性下降是缺了什么。提取酶主要是看酶的比活力還是神馬。。。

　　其實(shí)實(shí)驗(yàn)步驟和原理明白了就好了，還要看看書前面的那些操作使用方法和原理。

　　量取4.5毫升液體用什么移液管：應(yīng)該用10ml吸量管（注意看書p5下方吸量管的種類和使用）

　　微量加樣器的使用：裝吸液頭之后扭一下，保證不漏氣，吸液到第一停止點(diǎn)，緩慢釋放按鈕，停留1s，滑出，擦去吸液頭外面的液體，不擦尖端。放液先到第一停止點(diǎn)，停1s，到第二停止點(diǎn)，放液要貼壁，也是滑出。

　　分光光度法的原理：Lambert-Beer定律光吸收和什么因素有關(guān)A=-lgT直接比較法（公式法）、標(biāo)準(zhǔn)曲線法。標(biāo)準(zhǔn)曲線法A為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，取直線部分作定量依據(jù)。

　　凝膠層析：分子量大的先出，考了一道給了四種蛋白質(zhì)的分子量，問(wèn)哪個(gè)先出的。還考了一道分離不同分子量的蛋白質(zhì)用什么層析的。（親和層析、薄層層析的原理最好也看看吧）

　　離子交換層析：和后邊的血清γ球蛋白的實(shí)驗(yàn)一起考了好幾道題，等電點(diǎn)的概念還有離子交換層析的原理一定要清楚，題目會(huì)變換一下流動(dòng)相的ph什么的來(lái)考。咱們實(shí)驗(yàn)用的是DEAE—纖維素陰離子交換劑，具有堿性基團(tuán)，和流動(dòng)相中的陰離子進(jìn)行交換。

　　離心機(jī)的使用：尤其注意平衡哦~根據(jù)轉(zhuǎn)速的離心機(jī)的分類低速<6000r/min<高速<25000r/min<超速

　　各種離心方法：差速離心、密度梯度離心（速度區(qū)帶離心、等密度離心）、超速離心，要知道各種離心方法適用于分離什么。

　　光學(xué)顯微鏡的操作：左眼觀察右眼看圖，左手調(diào)焦右手移片或繪圖。低倍鏡轉(zhuǎn)到高倍鏡需要光圈調(diào)大。油鏡也出了一個(gè)選項(xiàng)，可以瞅一眼。

　　蟾蜍軟骨細(xì)胞中性紅染色：淡紅色的是細(xì)胞核和核仁，玫瑰紅色的是高爾基液泡。

　　大蒜根尖用鹽酸水解之后為什么要用蒸餾水洗3s

　　亞細(xì)胞組分沉降的先后：最先離心出的是細(xì)胞核，然后是線粒體，最終上清中是微粒體。沉降速度：細(xì)胞核>線粒體>微粒體。細(xì)胞核用甲基綠—派洛寧染色，甲基綠染的是DNA，綠色，派洛寧染RNA，紅色。為什么用冷玻片？細(xì)胞核過(guò)酒精是密度由高到低，每次3min。在丙酮中分色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)？詹納斯綠B染線粒體，綠色。

　　永久制片觀察：鐵蘇木精染線粒體：藍(lán)色。鍍銀染色：高爾基體，網(wǎng)狀，深棕色。考馬斯亮藍(lán)染微絲束，藍(lán)色。DNA的特異顯示方法（feulgen反應(yīng)）：60°C鹽酸水解使醛基暴露，和Schiff氏試劑（無(wú)色亞硫酸品紅）反應(yīng)成紫紅色化合物。考了一道為什么和希夫試劑反應(yīng)要放在抽屜里，避光防止變質(zhì)。胞質(zhì)被亮綠染成綠色。

　　乳酸脫氫酶在細(xì)胞中的定位分析：乳酸脫氫酶催化乳酸脫氫，傳遞給NAD+,顯色的是四唑鹽被還原成的雙甲臜藍(lán)紫色沉淀。

　　糖原同樣是希夫試劑和游離醛基反應(yīng)，成為PAS反應(yīng)。蘇丹黑染脂類為黑色。

　　蛋白質(zhì)含量的folin—酚法測(cè)定：酪氨酸帶有酚基，堿性條件下與銅離子螯合，使磷鉬酸—磷鎢酸還原生成藍(lán)紫色化合物，深淺可用分光光度法測(cè)，與蛋白質(zhì)含量成正比。（考了銅離子和氧化還原反應(yīng)、空白對(duì)照管）

　　血清γ球蛋白：前一部分初步分離是設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)哦~要提前自己設(shè)計(jì)，寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，實(shí)驗(yàn)之后再寫一份~考了好幾道離子交換柱層析的，改流動(dòng)相的ph先流出的是哪個(gè)蛋白啊，DEAE—纖維素的處理啊，層析的步驟順序啊，還有用20%磺基水楊酸檢驗(yàn)蛋白質(zhì)。SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳考了SDS作用、β巰基乙醇的作用、催化劑和引發(fā)劑、上下各是正負(fù)極、顯色、濃縮膠和分離膠的上下和緩沖液的ph、濃縮膠的作用、分離膠的作用（分子篩）、氯離子蛋白質(zhì)甘氨酸的遷移率、垂直板不連續(xù)電泳。染色用的是考馬斯亮藍(lán)，指示劑用的是溴酚藍(lán)。這個(gè)實(shí)驗(yàn)考了好多啊，好好看啊~！

　　血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定：血清提供的是酶（不是底物不是產(chǎn)物哦~）、丙酮酸和2,4—二硝基苯肼在堿性條件下生成棕色的丙酮酸二硝基苯腙、活性單位是每毫升血清在ph=7.4,37°C保溫30min每生成2.5μg丙酮酸作為一個(gè)酶活性單位。520nm比色。

　　唾液淀粉酶透析之后活性下降是缺了什么。提取酶主要是看酶的比活力還是神馬。。。

　　其實(shí)實(shí)驗(yàn)步驟和原理明白了就好了，還要看看書前面的那些操作使用方法和原理。

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