(推薦)生物實驗報告
在不斷進步的時代,報告的用途越來越大,不同種類的報告具有不同的用途。你所見過的報告是什么樣的呢?下面是小編整理的生物實驗報告,希望對大家有所幫助。
生物實驗報告1
一、實驗目的
(一)掌握一般培養基的制備原理及要求,掌握培養基酸堿度的測定,熟悉一
般培養基的制備過程和各種器皿滅菌方法。
(二)掌握細菌分離培養的基本要領和方法,掌握細菌抹片的制備方法和革蘭
氏染色法及油鏡的使用方法,并認識革蘭氏染色的反應特性。
(三)掌握學習用微生物學原理診斷疾病的一般方法及步驟。
二、實驗用品
(一)器材
量筒、燒杯、電子天平、漏斗、三角燒瓶、空試劑瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、ph試紙、紗布、脫脂棉、天平、電爐、試劑瓶瓶塞、扎繩、放大鏡、包裝紙、洗耳球、酒精燈、載玻片、火柴、吸水紙、剪刀、記號筆、接種環、注射器、鑷子、鉗子、毫米尺、培養箱、水浴培養箱、高壓蒸汽滅菌鍋、油鏡
(二)試劑及材料
肘胨、蛋白胨、豬膽鹽、氯化鈉、瓊脂、乳糖、0.01%結晶紫水溶液、0.5%中性紅水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氫氧化鈉、鹽酸、牛血清、革蘭氏染色液、蒸餾水、小白鼠、病豬內臟
三、實驗步驟
(一)培養基的制備
(所有用到的器皿都已121℃高壓滅菌15~30min,傾注平板在無菌操作臺內完成,并放在無菌操作臺內)
1、麥康凱培養基
(1)組成:蛋白胨17g、肘胨3g、豬膽鹽5g、氯化鈉5g、瓊脂17g、乳糖
10g、0.01%結晶紫水溶液10ml、0.5%中性紅水溶液5ml、蒸餾水1000ml
(2)方法:將蛋白胨、肘胨、豬膽鹽和氯化鈉溶解于400ml蒸餾水中,調節
ph至7.2。將瓊脂加入600ml蒸餾水中,并加入乳糖,加熱熔化。將兩
液混合,分裝于燒瓶內,用紗布、扎繩等捆好后,121℃高壓滅菌
15~30min。待冷卻至50~ 55℃時,加入結晶紫和中性紅水溶液,搖勻后
傾注平板。
注:結晶紫和中性紅水溶液配好后需經高壓滅菌。
2、血清平板
(1)組成:營養瓊脂、牛血清
(2)方法:將滅菌的營養瓊脂加熱熔化,冷卻至45~50℃時,加入牛血清,并
混勻,傾注平板。
注:不得將牛血清一并加入后再滅菌。
3、lb培養基
(1)組成:胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂15g
(2)方法:在950ml蒸餾水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、瓊脂和氯化鈉,調節ph至7.4,加熱熔化,分裝于瓶中,用紗布、扎繩等捆好后,121℃高壓滅菌15~30min。待冷卻至50~ 55℃時,傾注平板。
4、液體培養基(在lb培養基的基礎上,裝入大試劑瓶中,不加瓊脂,不分裝)
(二)病料取材
在病豬死亡后,首先用顯微鏡檢查其末梢血液膜片中是否有炭疽桿菌存在,未發現,則立即用消毒的器械對其進行生理解剖,觀察其病理特征現象,取出病豬的十二指腸、胃、肝臟三處的組織物,并注意組織的完整性,用儲物袋密封保存。
(三)細菌粗培養
1、消毒滅菌:操作人員先用消毒水清洗手或戴好實驗手套,再用消毒水對無菌操作臺內桌面及用酒精燈外焰對待用器械進行火焰滅菌。
2、接種
(1)在無菌操作臺酒精燈旁打開用儲物袋密封保存的病料,先左手持鑷子右
手持剪刀,把病料剪出一個小口。
(2)右手持滅過菌的接種環,左手持平板,并用拇指、食指及中指將平皿揭
開約20左右,然后將接種環前端插入小口旋轉一下后,再用劃線接種的方法接種到一個血清平板上。
(3)用記號筆在平板底部作好日期、操作人員、部位等標記,并將平板倒放。
以此方法,分別接種十二指腸、胃粘膜、肝臟于血清平板上,各接種2個血清平板。
3、培養:將接種好的血清平板倒扣放入37℃培養箱中,反向培養24小時。注:劃線接種時盡量劃開,以保證長出單個菌落,且劃線時接種環應盡量傾斜,以免劃破培養基(后同);待接種完畢后熄滅無菌操作臺內酒精燈,關閉好無菌操作臺窗口,打開無菌操作臺內的紫外燈。 。
(四)細菌純培養
1、菌落特征判斷
待粗培養的細菌培養24小時后,取出用放大鏡觀察記錄單個小菌落的形態特征并用實驗報告紙記錄好,并在平板底部上做好觀察標記,其形態特征包括大小、形狀、菌落邊緣、表面構造、隆起度、濕潤度、透明度、顏色等。
2、取單個菌落進行革蘭氏染色鏡檢
(1)取干凈的載玻片,用記號筆在其一面做好正反面標記,再在載玻片另一
面中央滴上一小滴蒸餾水。
(2)將接種環在火焰上滅菌,待冷卻后,在酒精燈旁從標記的單個小菌落中
取少許細菌置于蒸餾水中混勻(同時蓋好平板倒扣置于一旁),用接種環涂成直徑約1.5cm的菌膜,再在酒精燈火焰上方以鐘擺速度通過固定好細菌,待冷卻進行染色。
(3)先滴加草酸結晶紫溶液染色1~2min,再水洗;然后滴加革蘭氏碘液溶液
染色1~2min,再水洗;隨后滴加95%的酒精脫色30~60s,再水洗;最后滴加稀釋的品紅進行復染30~60s,再水洗;待干燥或吸水紙吸干后鏡檢。
(4)將干燥的載玻片放在1000倍油鏡下,滴加一滴松柏油進行鏡檢,觀察其
形態特征,判斷細菌的種屬。
3、細菌接種培養
(1)消毒滅菌:操作人員先用消毒水清洗手或戴好實驗手套,再用消毒水對
無菌操作臺內桌面及用酒精燈外焰對待用器械進行火焰滅菌。
(2)接種:右手持滅過菌的接種環,左手持平板,并用拇指、食指及中指將
平皿揭開約20左右,然后將接種環插入揭開的平板口內蘸去一下鏡檢標記的小菌落,再用劃線接種的方法接種到一個血清平板、lb平板或麥康凱平板上。并用記號筆在平板底部作好日期、操作人員、菌種、部位等標記,將平板倒放。
(3)將接種好的平板倒扣放入37℃培養箱中,反向培養24小時。
注:油鏡用完后應立即清理物鏡上的松柏油;劃線接種時盡量劃開,以保證長出單個菌落;待接種完畢后熄滅無菌操作臺內酒精燈,關閉好無菌操作臺窗口,打開無菌操作臺內的紫外燈。 。
(五)菌液的制備
1、鏡檢:用革蘭氏染色法在1000倍油鏡下鏡檢,觀察并記錄是否為純培養的細菌。
2、分裝液體培養基:先對無菌操作臺及需要使用的`器械進行消毒滅菌,然后用鉗子揭開一個空試劑瓶,用傾倒的方法在酒精燈旁從液體培養基大試劑瓶中分裝于空試劑瓶內,并立即蓋上液體培養基大試劑瓶瓶塞。
3、接種:右手持接種環,用火焰對其進行滅菌,待冷卻后,取出純培養的平板,在無菌操作臺內酒精燈旁,蘸去少許細菌,左手傾斜液體培養基,將接種環,伸入液體培養基內攪動,然后取出對接種火焰環滅菌,并用滅菌的包裝紙捆綁好后,用記號筆做好相應標記,置于一旁。
4、培養搖菌:將接種好的液體培養基置于水浴培養箱中培養24小時。注:分裝一個培養基就接種一個培養基,不得全部分裝完后再一個一個接種。
(六)小鼠致病性實驗
1、保定:選擇健康的青壯年小白鼠,先用右手抓住尾巴,旋轉數周讓其眩暈,然后用左手的拇指和食指捏住兩耳及頭部皮膚,并翻轉左手,使其頭部朝下,以達到內臟前移的目的。
2、接種:先用酒精棉球蘸取酒精對注射部位擦洗消毒,再用注射器注射吸取0.2ml菌液注射于小白鼠腹腔中。
3、觀察:將接種的小白鼠放在適宜的環境下生活,并在鼠籠處用記號筆標記好接種時間、菌種等。
4、再培養鑒定:待小白鼠死亡后,對其進行解剖,觀察其內臟病變情況,并取肝臟直接涂在相應培養基上,在適宜條件下反向培養24小時后,取菌落細菌進行鏡檢觀察判斷。
注:在注射小白鼠2小時候需要觀察小白鼠是否因注射時傷害到內臟而死亡。
生物實驗報告2
【探究內容】
探究種子萌發的環境條件
【探究目的】
1、了解種子萌發需要的環境條件。
2、學會進行探究實驗的一般方法。
【探究器材】
種子100粒、5個能蓋緊的罐頭瓶、小勺一個、餐巾紙10張、標簽紙5張
【探究過程】
提出問題:光的強弱會對種子萌發產生影響嗎?水的多少會對種子的萌發產生影響嗎?溫度的高低會對種子萌發產生影響嗎?空氣的流通會對種子萌發產生影響嗎?
做出假設:光的'強弱、水的多少、溫度的高低都會對種子的萌發產生一定的影響。
制定計劃:準備100顆綠豆種子,5個有蓋的瓶子,10張紙巾,5張便利貼。1號瓶的水只能濕透紙巾,并不能淹沒種子,放在空氣流通,有陽光的地方;2號瓶的水不但能濕透紙巾,而且能把種子淹沒,放在空氣流通,有陽光的地方;3號瓶的水只能濕透紙巾,并不能淹沒種子,用蓋子把瓶子蓋上,使瓶子空氣不能流通;4號瓶的水只能濕透紙巾,并不能淹沒種子,放在冰箱里,盡量使瓶子里的水不結冰;5號瓶不放水,放在空氣流通,有陽光的地方。
實施計劃:每天都進行實驗并觀察5個瓶子有什么變化,再把每天的變化都紀錄下來。
分析結果:1號瓶大部分能發芽;2號瓶的種子皮破了,但不能發芽;3號瓶只有少許發了芽;4號瓶和5號瓶沒有發芽
得出結論:想要種子發芽,一定要有適宜的光度;需要適量的水分,溫度也要控制好,空氣的流通也有一定的影響,但影響沒有光度、水分和溫度大,相對來說,空氣流通的影響較小。
這個實驗很簡單,我們在做實驗要分以上幾步完成,就會很容易的完成實驗。
【交流與評估】
1、根據你的問題和假設,應當將種子分成幾組?XX每組應有多少粒種子?XX每組只有一粒種子可以嗎?
2、對照組應提供的溫度、水分、空氣等條件應該如何?
3、每個實驗組的處理,除了所研究的條件外,其他環境條件是否應與對照組相同?
生物實驗報告3
一、實驗目的
1. 初步學會觀察植物細胞質壁分離和復原的方法。
2. 理解植物細胞發生滲透作用的原理。
二、實驗原理
當細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時,細胞液中的水分會通過原生質層進入外界溶液,導致細胞壁和原生質層收縮。由于原生質層的收縮性較大,隨著細胞不斷失水,原生質層逐漸與細胞壁分離,形成質壁分離。當細胞液的濃度大于外界溶液的濃度時,外界溶液中的水分透過原生質層進入細胞液,使原生質層逐漸恢復原狀,植物細胞逐漸發生質壁分離的.復原過程。
三、材料用具
紫色洋蔥鱗片葉、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、刀片、吸水紙、清水、0.3g/ml蔗糖溶液
四、實驗過程(見書p60)
物理實驗報告 ·化學實驗報告 ·生物實驗報告 ·實驗報告格式 ·實驗報告模板
五、討論
1. 如果把洋蔥表皮細胞浸泡在與細胞液等滲的蔗糖溶液中,這些細胞會發生質壁分離現象。
2.當紅細胞細胞膜兩側的溶液具有濃度差時,紅細胞會不會發生質壁分離現象?為什么?
3.繪制一組模式圖,描述一個細胞在正常狀態下,經過處理后的變化。首先將細胞放入0.3g/ml蔗糖溶液中處理,然后再經過清水處理。
生物實驗報告4
一、實驗目的:
1、學會如何使用顯微鏡觀察細胞;
2、了解細胞的結構;
3、學會制作臨時裝片。
二、實驗材料:(實驗材料可換)松針、動物血液、動物神經細胞永久裝片
三、實驗用具: 載玻片、蓋玻片、蒸餾水、滴管、鑷子、土豆、刀片、顯微鏡(物鏡5X、10X、40X)
四、方法步驟:
1、制作松針的臨時切片:
(1)取干凈的載玻片一個平置于試驗臺上,用滴管在載玻片中央滴一滴蒸餾水。
(2)將土豆切成條狀(截面約:0.5X0.5cm)取兩條,將一根松針夾在兩個土豆條之間,用刀片削成盡量薄的薄片,削時,手腕不動,靠大臂帶動小臂移動刀片。切片數次。從中選取較薄的切片,置于載玻片的水滴上。
(3)從一側輕輕蓋上蓋玻片,不要產生氣泡。用吸水紙輕輕吸去蓋玻片周圍的水滴,即完成臨時切片的'制作。
2、觀察切片:
(1)取出顯微鏡,置于試驗臺上靠左的位置,打開光源。
(2) 將上步制作好的切片置于顯微鏡的載物臺上,調整載物臺位置,使蓋玻片對準光源。
(3)使用5X物鏡觀察切片,使松針切片在視野中心,換成10X物鏡,觀察松針葉面橫切結構。
(4)換成40X物鏡觀察,注意細胞及細胞內物質結構,畫圖。
3、動物血液臨時裝片的制作及觀察(除了不用切片,其他類似)
4、 動物神經細胞永久裝片的觀察。
五、反思:
1、松針的葉面結構是什么樣的?
2、動物細胞的結構是什么樣的?與植物細胞又什么不同?
3、顯微鏡的物鏡倍數愈大,視野的亮度如何?物體的大小如何?
4、如何調節焦距?
5、如何才能使切片盡量的薄?切片的厚薄對顯微鏡下觀察的效果有什么影響。
生物實驗報告5
一、實驗目的
1、觀察植物細胞有絲分裂的過程,識別有絲分裂的不同時期。
2、初步掌握制作洋蔥根尖有絲分裂裝片的技能。
3、初步掌握繪制生物圖的方法。
二、實驗原理
在植物體中,有絲分裂常見于根尖、莖尖等分生區細胞,高等植物細胞有絲分裂的過
程,分為分裂間期和分裂期的前期、中期、后期、末期。可以用高倍顯微鏡觀察植物細胞的
有絲分裂的過程,根據各個時期細胞內染色體(或染色質)的變化情況,識別該細胞處于有
絲分裂的哪個時期,細胞核內的染色體容易被堿性染料著色。
三、材料用具
洋蔥根尖、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、培養皿、鉛筆、質量分數為15%的'鹽酸、
體積分數為95%的酒精、質量分數為0.01g/ml的龍膽紫(或紫藥水)
四、實驗過程(見書P39)
1、洋蔥根尖的培養(提前3—4天)
2、解離:5min
3、漂洗:10min
4、染色:5min
5、制片
6、鏡檢
五、注意
1、解離充分是實驗成功的必備條件。解離充分,組織才能分散,細胞也不會重疊。
2、漂洗時間一定要足夠,否則細胞染不上色。
3、染色時,染液的濃度和染色時間必須掌握好。特別是染色不能過深,否則鏡下一片紫色,無法觀察。
六、討論
1、制作好洋蔥根尖有絲分裂裝片的關鍵是什么?談談你自己的體會。
2、在觀察清楚有絲分裂各個時期的細胞以后,繪出洋蔥根尖細胞有絲分裂的簡圖,并標明時期。
生物實驗報告6
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞:顯微鏡、洋蔥表皮細胞切片,及其他細胞裝片。
一、目的:在實驗過程中為學生提供多種細胞裝片,以供學生操作、觀察,增加了學生動手實驗的時間,使學生在實驗中經歷調節顯微鏡的焦距的過程,從而熟練掌握教學教學顯微鏡的使用方法。
二、步驟:
1、右手握住鏡臂,左手托住鏡座,把顯微鏡向著光放在實驗臺上。
2、對光:轉動轉換器,使低倍物鏡對準通光孔。
3、調節載物臺下的反光鏡,從目鏡往下看,能看見亮的光圈。
4、觀察:調節粗準焦螺旋,把所要觀察的.洋蔥表皮切片放在載物臺上,用壓片夾夾住,標本要正對通光孔的中央。
5、左眼向目鏡內看,同時轉動粗準焦螺旋等,直到看清切片上的細胞為止,最后整理器材。
三、注意事項:
1、取送顯微鏡時,應右手握住鏡臂,左手托住鏡座,輕拿輕放。
2、鏡檢時,坐姿端正,一般用左眼觀察物象,用右眼看著實驗報告紙畫圖。兩眼須同時睜開。
3、切忌一面從目鏡進行觀察,一面使鏡筒下降,這樣容易使物鏡與玻片標本碰撞而損壞。
4、在高倍鏡下調節焦距時,切勿使用粗調節器,以免壓壞標本,損壞物鏡。
5、顯微鏡使用完畢必須先上升鏡筒,移開鏡頭后再取出玻片標本,以免取玻片時擦損鏡頭的鏡面。
生物實驗報告7
一、實驗目的
了解細胞膜[1]的滲透性及各類物質進入細胞的速度[2]
二、實驗原理
1、在等滲溶液中,細胞對各種溶質的透過性不同。有的溶質可以進入,有的溶質不能滲入。
2、滲入的溶質能提高細胞的滲透壓,促進水分子進入細胞,引起溶血現象[3]。
3、不同的溶質滲入到細胞內的速度不同,因此溶血時間也不同。
三、實驗材料
新鮮血液(雞血、豬血、牛血等)
四、實驗器材
試管(1.5cmX18cm)、試管架、10ml移液管、1ml移液管、200ml燒杯(2個)、250ml容量瓶、移液槍、膠頭滴管、菜刀、吸球、電子天平、顯微鏡、蓋玻片、載玻片、秒表
五、實驗藥品及試劑
0.17MNaCl、0.17MNH4Cl、0.17MNH4Ac、0.17MNaNO3、0.12MNa2SO4、0.12M草酸銨、0.32M葡萄糖、0.32M甘油、0.32M乙醇、0.32M丙酮、肝素抗凝劑[4]
六、實驗步驟
1、制備血液稀釋液
(1)抗凝劑的制備:首先稱取1克肝素鈉粉末,然后加入0.17MNaCl溶液10ml(1∶10的比例),混合均勻,制成肝素抗凝劑。
(2)血液稀釋液的制備:取新鮮血液,按比例(肝素抗凝劑:血液=1∶10)混合均勻,配制成經肝素抗凝的血液[5][6]。
(3)按比例(經肝素抗凝的血液∶0.17MNaCl溶液=1∶10)混合均勻,形成一種不透明的紅色液體[7]。
2、低滲溶液(空白對照)的觀察
取試管一只,加入10ml蒸餾水,然后再加入1ml稀釋的血液。注意觀察溶液顏色的`變化。結果是溶液由不透明的紅色變為澄清。記錄下這個過程所要的時間。
3、紅血球的滲透性
按表一的配制,分別在下列十種等滲溶液中進行實驗。輕輕搖動,注意有無顏色變化,是否有溶血現象發生,記下時間(自加入稀釋血液到溶液逐漸由紅色變為透明澄清,紅血球全部溶血所需時間),填入表一的空格中。
4、顯微觀察
[1]何為細胞膜?[5]注意:這一步,動作要非常迅速,否則雞血會凝固。或者先把抗凝劑加入到燒杯中,再加入新鮮的[2]雞血,邊加邊震蕩即可。為何不同物質進入細胞的速度不同?[6]為什么新鮮的雞血會凝固?[3]何為溶血現象?[7]為什么這一步要使用0.17M的NaCl溶液?[4]你知道有哪些血液抗凝劑?
(1)血液紅細胞的觀察
滴一滴稀釋的血液于載玻片上,蓋上蓋玻片。用光學顯微鏡觀察細胞的種類、形狀和顏色。
(2)細胞破碎的觀察
在上一步的載玻片的一端滴加清水,在另一端吸水,并在顯微鏡下觀察細胞的破裂。
七、實驗結果與分析
1、比較和分析你所觀察到的實驗結果,并解釋原因。
結果:
(1)在所提供的試劑中不溶血的有:
(2)在所提供的試劑中不完全溶血的有:
(3)在所提供的試劑中完全溶血的有:
結果分析與比較:結論:
2、繪制你所觀察到的血液細胞圖。
3、討論溶血實驗在研究中應用的可能性。
生物實驗報告8
實驗名稱:
觀察洋蔥表皮細胞。
實驗目的:
1、學習制作洋蔥表皮玻片標本。
2、學會使用顯微鏡觀察洋蔥表皮,用圖畫記錄觀察到的洋蔥表皮細胞。
3、對比用肉眼、放大鏡、顯微鏡看到的洋蔥表皮各有什么不同。
實驗重點:
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞。
實驗難點:
正確使用顯微鏡。
實驗準備:
分組實驗器材:顯微鏡、洋蔥、小刀、清水、滴管、吸水紙、載玻片、蓋玻片、鑷子、放大鏡等。 實驗過程:
一、導入課題
出示洋蔥。問:如果從它的內表皮上揭下一塊,用顯微鏡來觀察能看到些什么呢?(板書課題)
二、制作洋蔥表皮玻片標本
1、師講解并演示制作洋蔥表皮玻片標本的方法與步驟。
(1)在一個干凈的玻璃載片中間滴一滴清水;
(2)用小刀在洋蔥鱗葉片內壁劃一個“井”字,用鑷子取下“井”中洋蔥內表皮放到載玻片的水滴中央,注意標本要平展開,不能折疊;
(3)用蓋玻片傾斜著蓋到標本上面,放蓋玻片時,先放一端,再慢慢放下另一端,注意不要有氣泡。如水不足,可沿蓋玻片邊緣滴加;若水分過多,可用吸水紙吸掉;
(4)從蓋玻片的一邊滴一滴稀釋的碘酒,并把玻片微微傾斜,再在蓋玻片的另一邊用吸水紙吸掉多余的水;
(5)洋蔥表皮玻片標本做成可進行觀察。
2、學生以組為單位自制玻片標本(最好制三份裝片,便于下面的對比觀察),教師巡視指導(教育學生注意安全)。
三、觀察洋蔥表皮細胞
1、先用肉眼觀察洋蔥表皮將看到的內容畫在科學記錄本上。
2、再用放大鏡觀察洋蔥表皮將看到的內容畫到科學記錄本上。
3、學生交流用肉眼和放大鏡分別觀察到什么?它們有何不同?
4、利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞。
(1)、出示顯微鏡,引導學生認識顯微鏡,簡介各部分的名稱、功能及使用方法,學生每5人一組操作熟悉顯微鏡。
(2)、各組利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細胞。(師操作演示:安放――對光――上片――調焦――觀察。生一步步跟著操作。)
(3)、學生觀察、記錄、描畫洋蔥表皮細胞。教師巡視指導,各組的實驗組長監督組員操作是否規范,要求每個人都要操作、都要觀察,并將觀察結果進行交流。組長將大家在顯微鏡下的發現畫到科學記錄本上。
5、全班交流在顯微鏡下的發現。
(1)各組推薦發言代表談自己的發現。
(2)各組將所畫的觀察結果向全班展示。
(3)交流討論評價。
6、師小結:我們發現放大鏡比肉眼、顯微鏡比放大鏡看到的.細節更多,更清楚。我們發現洋蔥表皮是由一個個比較規則的多邊形組成的,而且大多呈長方形,外為細胞壁,內為無色細胞質和細胞核。洋蔥表皮上的一個個小房間似的結構,就是洋蔥的細胞。(師一邊描述一邊畫洋蔥細胞簡圖)
四、實驗結束。
回收實驗器材,整理實驗桌。
生物實驗報告9
質粒DNA的提取、純化及檢測
姓名:XXX學號:2011001400XX年級:20xx級生物基地班 實驗日期:20xx年9月16日—30日組別:6組 同組者:XX
一、【實驗目的】
1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質粒DNA的原理和方法。
2、學習并掌握凝膠電泳進行DNA的分離純化的實驗原理。
3、學習并掌握凝膠的制備及電泳方法。
4、學習并掌握凝膠中DNA的分離純化方法。
二、【實驗原理】
1、質粒DNA的制備方法
質粒(Plasmid)是獨立存在于染色體外、能自主復制并能穩定遺傳的一種環狀雙鏈DNA分子,分布于細菌、放線菌、真菌以及一些動植物細胞中,但在細菌細胞中含量最多。細菌質粒大小介于1~200Kb之間,是應用最多的質粒類群,在細菌細胞內它們利用宿主細胞的復制機構合成質粒自身的DNA。
質粒DNA的制備包括3個步驟:①培養細菌,使質粒DNA大量擴增;②收集和裂解細菌;③分離和純化質粒DNA。主要方法包括:堿裂解法:0。2molNaOH+1%SDS;煮沸裂解法:沸水煮沸40秒;SDS裂解法:10%SDS,一般用于質粒大量提取。在實際操作中可以根據宿主菌株類型、質粒分子大小、堿基組成和結構等特點以及質粒DNA的用途進行選擇。本實驗選擇堿裂解法提取質粒DNA。
2、質粒DNA的提取——堿變性提取法
在細菌細胞中,染色體DNA和質粒DNA均被釋放出來,但是兩者變性與復性所依賴的溶pH值不同。在pH值高達12。0的堿性溶液中,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性;共價閉合環狀質粒DNA的大部分氫鍵斷裂,但兩條互補鏈不完全分離。因為它們在拓撲學上是相互纏繞的。當用pH值4。6的KAc(NaAc)高鹽溶液調節堿性溶液至中性時,變性的質粒DNA可恢復原來的共價閉合環狀超螺旋結構而溶解于溶液中;但染色體DNA不能復性,而是與不穩定的大分子RNA、蛋白質—SDS復合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心,與復性的溶于溶液的質粒DNA分離。溶于上清液的質粒DNA,可用無水乙醇和鹽溶液,使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性質類似,乙醇沉淀
DNA的同時,也伴隨著RNA沉淀,可利用RNaseA將RNA降解。質粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白,可通過酚/氯仿抽提除去,最后獲得純度較高的質粒DNA。
3、凝膠電泳進行DNA分離純化
電泳(electrophoresis)是帶電物質在電場中向著與其電荷相反的電極方向移動的現象。各種生物大分子在一定pH條件下,可以解離成帶電荷的離子,在電場中會向相反的電極移動。凝膠是支持電泳介質,它具有分子篩效應。含有電解液的凝膠在電場中,其中的電離子會發生移動,移動的速度可因電離子的大小形態及電荷量的不同而有差異。利用移動速度差異,就可以區別各種大小不同的分子。因而,凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化DNA的片段,是分子生物學的核心技術之一。
凝膠電泳技術操作簡單而迅速,分辨率高,分辨范圍廣。此外,凝膠中DNA的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠(ethidium bromide,EB)或SYBR Gold染色直接觀察到,甚至含量少至20pg的雙鏈DNA在紫外激發下也能直接檢測到。需要的話,這些分離的DNA條帶可以從凝膠中回收,用于各種各樣目的`的實驗。
分子生物學中,常用的兩種凝膠為瓊脂糖(agarose)和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑,也能以許多不同的構型和方位進行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高,使用于較小分子核酸(5—500bp)的分離和蛋白質電泳。它的分辨率非常高,長度上相差1bp或質量上相差0。1%的DNA都可以彼此分離,這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進行DNA序列分析的分子基礎。雖然它能很快地進行電泳,并能容納較大的DNA上樣量,但是與瓊脂糖凝膠相比,在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長鏈狀多聚物,由β—D—吡喃半乳糖與3,6—脫水—L—吡喃半乳糖組成,相對分子質量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右,即可溶化形成清亮、透明的液體,澆在模版上冷卻后形成凝膠,其凝固點為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低,但它的分離范圍更大(50至百萬bp),小片段DNA(50—20000bp)最適合在恒定輕度和方向的電場中水平方向的瓊脂糖凝膠內電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作,適用于核酸電泳,測定DNA的相對分子質量,分離經限制酶水解的DNA的片段,進一步純化DNA等。
瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中,由于核酸有磷酸基而帶有負電荷,在電場中向正極移動。DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個因素:樣品DNA分子的大小、DNA分子的構象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場、緩沖液和溫度。
三、【實驗材料】
1、實驗儀器
培養皿、接種環、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養箱、50ml離心管、1。5ml塑料離心管(Eppendorf管)、高速離心機、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛生紙和記號筆、手套等。
2、實驗試劑
LB培養基,抗生素Ap(氨芐青霉素),溶液Ⅰ,溶液Ⅱ,溶液Ⅲ,RNaseA母液,TE緩沖液,飽和酚,氯仿/異戊醇混合液,酚/氯仿/異戊醇(PCI)混合液,預冷無水乙醇,TAE電泳緩沖液(10×),上樣緩沖液(6×),瓊脂糖,溴化乙錠(EB),DNA相對分子質量標準物DNA Marker λ/Hind Ⅲ,5mol/L pH 5。2的醋酸鈉。
四、【實驗步驟】
1、準備實驗
配制LB液體培養基,分裝到100ml的三角瓶中20ml,300ml的三角瓶中50ml,另配LB固體培養基;準備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒,1。5ml離心管若干于500ml三角瓶中,50ml離心管2個 ,將上述物品包好連同配好的培養基一同滅菌。
2、菌體培養
在含有Ap的LB平板上挑取一環攜帶有質粒pUC19的E。coli DH5單菌落,接種于20mlLB液體培養基中進行37℃振蕩過夜培養,培養基中加Ap100ul
(100ug/ml),質粒pUC19具有Ap抗性基因,使得帶有pUC19的質粒得以生長。 過夜培養后菌體量大,雜質較多,然后用移液槍吸取過夜培養物2ml轉接于50mlLB液體培養基中,培養基中加入Ap250ul,37℃振蕩培養4—6h至對數生長期后期,生長速率快,代謝旺盛,酶系活躍,雜質少,適合提取質粒。
3、質粒提取
(1)稱量空的50ml離心管的重量為14。331g,然后將三角瓶中的菌液倒至管中,不能倒滿,液面距管口約1cm,7000rpm離心5分鐘后棄去上清液,收集菌體細胞。
(2)向離心管中懸滴加入5ml冰預冷的溶液Ⅰ打散菌體洗滌,用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻,同步驟(1)離心,棄去上清,將離心管倒置于吸水紙上,使上清液全部流盡干燥,然后稱重得14。437g,則菌體質量為106mg。
(3)洗滌后每100mg菌體應加入冰預冷的溶液Ⅰ1ml,106mg菌體按100mg菌體處理,加入溶液Ⅰ1ml,打散菌泥、吹吸混勻,冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使
溶液密度增加,懸浮后的大腸桿菌不會快速沉積到管子的底部;維持滲透壓,防止細胞提前破裂,防止DNA受機械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價金屬離子的螯合劑,可抑制DNase的活性,抑制微生物的生長。Tris—Cl溶液提供適當的pH。
(4) 按比例加入新配制的溶液Ⅱ2ml(與溶液Ⅰ對應),輕加輕搖,冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液Ⅱ中的NaOH使細胞膜發生了從bilayer(雙層膜)結構向micelle(微囊)結構的相變化導致細胞溶解。同時,強堿性使染色體DNA、質粒DNA和蛋白質變性;SDS為下一步沉淀做鋪墊。
(5)按比例加入冰預冷的溶液Ⅲ1。5ml(與溶液Ⅰ、Ⅱ對應),輕加輕搖,冰浴10min。溶液出現白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質SDS復合物、細胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH,因為長時間的堿性條件會打斷基因組DNA,只要是50-100 kb大小的片斷,就不能再被PDS共沉淀。同時變性的質粒DNA復性。反應形成的高鹽環境進一步加速了沉淀。
(6)12000rpm離心15min,白色沉淀聚集在離心管一側,用移液槍將上清液轉移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3MNaAc混勻,加入2倍體積的冰無水乙醇,混勻,—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應,對DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態穩定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。在pH為8左右的溶液中,DNA分子是帶負電荷的,加一定濃度的NaAc或NaCl,易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀。
(7) 以12000rpm離心15min,小心倒去上清液,得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇,輕輕地覆蓋沉淀,不打散沉淀,洗滌一次。
(8)以12000rpm離心5min,離心管底部DNA沉淀所在面應與收集沉淀面一致。去掉上清液,將離心管上沉淀部位做好標記,將離心管倒置于吸水紙上,干燥5min。粗提取的質粒呈淺黃色,隨著水分的減少質粒變為無色。所以為了完全溶解質粒,要在離心管上標記質粒所在位置。
(9)將DNA沉淀溶于1mlTE緩沖液中,移液槍吹吸助溶,然后將溶解液轉移到一個Eppendorf管中。TE是pH緩沖液,為DNA提供穩定的生理狀態,呈弱堿性,有利于保護堿基對。同時含有EDTA是二價陽離子的螯合劑,抑制DNA酶作用。
4、質粒純化
(1)Eppendorf管中加入RNase A(純濃度>50ug/ml),37℃保溫0。5—1h
(2)將上述的溶液平均分配到2個1。5ml的微量離心管中,每管0。5ml,分別加入與溶液等體積的(500ul)Tris飽和苯酚溶液,振蕩混勻,7000rpm,離心5min,上清液轉移到一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是經Tris飽和后的,顯黃色。苯
酚加入后,溶液分層,苯酚向下,下層呈淺黃色,上層溶液無色,在中間產生大量白色沉淀,此為變性后的蛋白質。
(3)加入等體積的(500ul)苯酚/氯仿溶液(1:1),振蕩混勻, 7000rpm,離心5min,上清液轉移到到另一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是強的蛋白變性劑,但是苯酚留在質粒溶液中會影響DNA的酶切,它本身易被氧化,會損傷質粒。氯仿也是蛋白變性劑,但是比酚弱,且能溶解質粒中的脂類,溶解苯酚,去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現的泡沫,有利于分層更明顯。此時溶液中已看不到明顯的白色沉淀,但仍有蛋白質的存在。
(4)加入等體積的氯仿溶液,振蕩混勻, 7000rpm,離心5min,上清液轉移到一潔凈的Eppendorf管中,得上清液400ul。
(5)向上清液中加入1/10體積的NaAc混勻,再加入2倍體積的冰無水乙醇,混勻,—20℃下沉降30分鐘。
(6)以12000rpm,離心15min,棄去上清液,得到DNA沉淀,為白色。
(7)向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul,不打散沉淀,洗滌。然后以12000rpm離心5min,離心管底部DNA沉淀所在面應與收集沉淀面一致。
(8)去掉上清液,將離心管倒置于吸水紙上,室溫干燥。用50ulTE溶解于1管中。
5、質粒檢測
(1)稱取0。4g的瓊脂糖,置于一錐形瓶中,在三角瓶上標好液面位置,加入40ml的1×TAE電泳緩沖液,再加入5—10ml重蒸水,以補充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化,溶液透明。冷卻至50℃左右,倒入制板槽制板。
(2)待膠凝固后,小心拔起梳子,使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內。在槽內加入1×TAE 電泳緩沖液,至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質粒樣品于小紙片上,用移液槍混勻。
(3)電泳1h,觀察溴酚蘭的帶(藍色)的移動。
(4) 把膠槽取出,小心滑出膠塊,放進EB溶液中進行染色,完全浸泡約5min。
(5)凝膠成像儀觀察。
五、【注意事項】
(1)滴加溶液II時,要逐滴加入,且要輕加輕搖溶液使之混勻,整體動作要快,因為強堿在溶液中停留時間不能過長,否則會破壞質粒DNA。
(2)加入溶液III后,生成了大量的絮狀沉淀,溶液III中和強堿使質粒復性,不可劇烈震蕩, 防止染色體DNA斷裂,應該上下顛倒離心管,使其混勻。
生物實驗報告10
實驗生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質的鑒定
一、實驗目的
初步掌握鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質的基本方法。
二、實驗原理
1.還原糖的鑒定原理生物組織中普遍存在的還原糖種類較多,常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內都含有還原性基團(游離醛基或游離酮基),因此叫做還原糖。蔗糖的分子內沒有游離的半縮醛羥基,因此叫做非還原性糖,不具有還原性。本實驗中,用斐林試劑只能檢驗生物組織中還原糖存在與否,而不能鑒定非還原性糖。
斐林試劑由質量濃度為0.1 g/mL的氫氧化鈉溶液和質量濃度為0.05g/mL的硫酸銅溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡藍色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下,能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應式如下:
CH2OH—(CHOH)4—CHO+2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH+Cu2O↓+2H2O
用斐林試劑鑒定還原糖時,溶液的顏色變化過程為:淺藍色棕色磚紅色(沉淀)。
2.蛋白質的鑒定原理鑒定生物組織中是否含有蛋白質時,常用雙縮脲法,使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的`成分是質量濃度為0.1 g/mL的氫氧化鈉溶液(A)和質量濃度為0.01 g/mL(B)的硫酸銅溶液。在堿性溶液(NaOH)中,雙縮脲(H2NOC—NH—CONH2)能與Cu2+作用,形成紫色或紫紅色的絡合物,這個反應叫做雙縮脲反應。由于蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵,因此,蛋白質可與雙縮脲試劑發生顏色反應。
3.脂肪的鑒定原理脂肪可以被蘇丹Ⅲ染成橘黃色,被蘇丹Ⅳ 染成紅色
三、實驗過程(見書P18)
四、實驗用品(見書P18)
五、注意
1.關于鑒定還原糖的實驗,在加熱試管中的溶液時,應該用試管夾夾住試管上部,并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部,同時試管口不要朝向實驗者,以免試管內溶液沸騰時沖出試管,造成燙傷。如果試管內溶液過于沸騰,可以上提試管夾,使試管底部離開大燒杯中的開水。
2.斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用,切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。
3.蛋白質的鑒定中先加雙縮脲A,再加雙縮脲B
六、討論
鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質的根據是什么?
生物實驗報告11
一、實驗目的
1.初步學會探索酶催化特定化學反應的方法。
2.探索淀粉酶是否只能催化特定的化學反應。
二、實驗原理
淀粉和蔗糖都是非還原糖,它們在酶的催化作用下都能水解成還原糖,還原糖能夠與斐林試劑發生氧化還原反應,生成磚紅色的'氧化亞銅沉淀。
用淀粉酶分別催化淀粉溶液和蔗糖溶液,再用斐林試劑鑒定溶液中有無還原糖,就可以看出淀粉酶是否能催化這兩種化學反應。
三、材料用具
滴管、試管、火柴、試管架、溫度計、三腳架、石棉網、酒精燈、燒杯、質量分數為2%的新鮮淀粉酶溶液、質量分數為3%的可溶性淀粉溶液、質量分數為3%的蔗糖溶液、斐林試劑
四、實驗過程
(見書P47)
五、討論
1.制備的可溶性淀粉溶液,必須完全冷卻后才能使用。為什么?
2.兩支試管保溫時,為什么要控制在60℃左右(低于50℃或高于75℃)?
3.如果2號試管也產生了磚紅色沉淀,可能是由哪些原因造成的?
生物實驗報告12
實驗一觀察DNA和RNA在細胞中的分布
實驗原理:DNA綠色,RNA紅色
分布:真核生物DNA主要分布在細胞核中,線粒體和葉綠體內也含有少量的DNA;RNA主要分布在細胞質中。
實驗結果:細胞核呈綠色,細胞質呈紅色。
實驗二物質鑒定
還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀
脂肪+蘇丹III橘黃色
脂肪+蘇丹IV紅色
蛋白質+雙縮脲試劑紫色反應
1、還原糖的檢測
(1)材料的選取:還原糖含量高,白色或近于白色,如蘋果,梨,白蘿卜。
(2)試劑:斐林試劑(甲液:0.1g/mL的NaOH溶液,乙液:0.05g/mL的CuSO4溶液),現配現用。
(3)步驟:取樣液2mL于試管中→加入剛配的斐林試劑1mL(斐林試劑甲液和乙液等量混合均勻后再加入)→水浴加熱2min左右→觀察顏色變化(白色→淺藍色→磚紅色)
★模擬尿糖的檢測
1、取樣:正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、檢測方法:斐林試劑(水浴加熱)或班氏試劑或尿糖試紙
3、結果:(用斐林試劑檢測)試管內發生出現磚紅色沉淀的是糖尿病患者的尿液,未出現磚紅色沉淀的是正常人的尿液。
4、分析:因為糖尿病患者的尿液中含有還原糖,與斐林試劑發生反應產生磚紅色沉淀,而正常人尿液中無還原糖,所以沒有發生反應。
2、脂肪的檢測
(1)材料的選取:含脂肪量越高的組織越好,如花生的子葉。
(2)步驟:制作切片(切片越薄越好)將最薄的花生切片放在載玻片中央
染色(滴蘇丹Ⅲ染液2~3滴切片上→2~3min后吸去染液→滴體積分數50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)
制作裝片(滴1~2滴清水于材料切片上→蓋上蓋玻片)
鏡檢鑒定(顯微鏡對光→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察染成橘黃色的脂肪顆粒)
3、蛋白質的檢測
(1)試劑:雙縮脲試劑(A液:0.1g/mL的NaOH溶液,B液:0.01g/mL的CuSO4溶液)
(2)步驟:試管中加樣液2mL→加雙縮脲試劑A液1mL,搖勻→加雙縮尿試劑B液4滴,搖勻→觀察顏色變化(紫色)
考點提示:
(1)常見還原性糖與非還原性糖有哪些?
葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖;淀粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。
(2)還原性糖植物組織取材條件?
含糖量較高、顏色為白色或近于白色,如:蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜等。
(3)研磨中為何要加石英砂?不加石英砂對實驗有何影響?
加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會使組織樣液中還原性糖減少,使鑒定時溶液顏色變化不明顯。
(4)斐林試劑甲、乙兩液的使用方法?混合的目的?為何要現混現用?
混合后使用;產生氫氧化銅;氫氧化銅不穩定。
(5)還原性糖中加入斐林試劑后,溶液顏色變化的順序為:淺藍色棕色磚紅色
(6)花生種子切片為何要薄?只有很薄的切片,才能透光,而用于顯微鏡的觀察。
(7)轉動細準焦螺旋時,若花生切片的細胞總有一部分清晰,另一部分模糊,其原因一般是什么?切片的厚薄不均勻。
(8)脂肪鑒定中乙醇作用?洗去浮色。
(9)雙縮脲試劑A、B兩液是否混合后用?先加A液的目的。怎樣通過對比看顏色變化?
不能混合;先加A液的目的是使溶液呈堿性;先留出一些大豆組織樣液做對比。
實驗三觀察葉綠體和細胞質流動
1、材料:新鮮蘚類葉、黑藻葉或菠菜葉,口腔上皮細胞臨時裝片
2、原理:葉綠體在顯微鏡下觀察,綠色,球形或橢球形。
用健那綠染液染色后的口腔上皮細胞中線粒體成藍綠色,細胞質接近無色。
知識概要:
取材制片低倍觀察高倍觀察
考點提示:
(1)為什么可直接取用蘚類的小葉,而不能直接取用菠菜葉?
因為蘚類的小葉很薄,只有一層細胞組成,而菠菜葉由很多層細胞構成。
(2)取用菠菜葉的下表皮時,為何要稍帶些葉肉?
表皮細胞除保衛細胞外,一般不含葉綠體,而葉肉細胞含較多的葉綠體。
(3)怎樣加快黑藻細胞質的流動速度?最適溫度是多少?進行光照、提高水溫、切傷部分葉片;25℃左右。
(4)對黑藻什么部位的細胞觀察,所觀察到的細胞質流動的現象最明顯?葉脈附近的細胞。
(5)若視野中某細胞中細胞質的流動方向為順時針,則在裝片中該細胞的.細胞質的實際流動方向是怎樣的?仍為順時針。
(6)是否一般細胞的細胞質不流動,只有黑藻等少數植物的細胞質才流動?
否,活細胞的細胞質都是流動的。
(7)若觀察植物根毛細胞細胞質的流動,則對顯微鏡的視野亮度應如何調節?
視野應適當調暗一些,可用反光鏡的平面鏡來采光或縮小光圈。
(8)在強光照射下,葉綠體的向光面有何變化?葉綠體的受光面積較小有一面面向光源實驗四觀察有絲分裂。
1、材料:洋蔥根尖(蔥,蒜)
2、步驟:
(一)洋蔥根尖的培養
(二)裝片的制作
制作流程:解離→漂洗→染色→制片
1.解離:藥液:質量分數為15%的鹽酸,體積分數為95%的酒精(1:1混合液)。時間:3~5min.目的:使組織中的細胞相互分離開來。
2.漂洗:用清水漂洗約10min.目的:洗去藥液,防止解離過度,并有利于染色。
3.染色:用質量濃度為0.01g/mL或0.02g/mL的龍膽紫溶液(或醋酸洋紅液)染色3~5min。目的:使染色體著色,利于觀察。
4.制片:將根尖放在載玻片上,加一滴清水,并用鑷子把根尖弄碎,蓋上蓋玻片,在蓋玻片上再加一片載玻片。然后用拇指輕輕地按壓載玻片。目的:使細胞分散開來,有利于觀察。
(三)觀察
1、先在低倍鏡下找到根尖分生區細胞:細胞呈正方形,排列緊密,有的細胞正在分裂。
2、換高倍鏡下觀察:分裂中期→分裂前、后、末期→分裂間期。(注意各時期細胞內染色體形態和分布的特點)。其中,處于分裂間期的細胞數目最多。
考點提示:
(1)培養根尖時,為何要經常換水?增加水中的氧氣,防止根進行無氧呼吸造成根的腐爛。
(2)培養根尖時,應選用老洋蔥還是新洋蔥?為什么?應選用舊洋蔥,因為新洋蔥尚在休眠,不易生根。
(3)為何每條根只能用根尖?取根尖的時間是何時?為何?
因為根尖分生區的細胞能進行有絲分裂;上午10時到下午2時;因為此時細胞分裂活躍。
(4)解離和壓片的目的分別是什么?壓片時為何要再加一塊載玻片?解離是為了使細胞相互分離開來,壓片是為了使細胞相互分散開來;再加一塊載玻片是為了受力均勻,防止蓋玻片被壓破。
(5)若所觀察的組織細胞大多是破碎而不完整的,其原因是什么?壓片時用力過大。
(6)解離過程中鹽酸的作用是什么?丙酮可代替嗎?分解和溶解細胞間質;不能,而硝酸可代替。
(7)為何要漂洗?洗去鹽酸便于染色。
(8)細胞中染色最深的結構是什么?染色最深的結構是染色質或染色體。
(9)若所觀察的細胞各部分全是紫色,其原因是什么?
染液濃度過大或染色時間過長。
(10)為何要找分生區?分生區的特點是什么?能用高倍物鏡找分生區嗎?為什么?
因為在根尖只有分生區的細胞能夠進行細胞分裂;分生區的特點是:細胞呈正方形,排列緊密,有的細胞處于分裂狀態;不能用高倍鏡找分生區,因為高倍鏡所觀察的實際范圍很小,難以發現分生區。
(11)分生區細胞中,什么時期的細胞最多?為什么?間期;因為在細胞周期中,間期時間最長。
(12)所觀察的細胞能從中期變化到后期嗎?為什么?
不能,因為所觀察的細胞都是停留在某一時期的死細胞。
(13)觀察洋蔥表皮細胞能否看到染色體?為什么?不能,因為洋蔥表皮細胞一般不分裂。
(14)若觀察時不能看到染色體,其原因是什么?
沒有找到分生區細胞;沒有找到處于分裂期的細胞;染液過稀;染色時間過短。
生物實驗報告13
實驗名稱:
用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細胞質流動
一、實驗目的
1.初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。
2.觀察高等植物的葉綠體在細胞質基質中的形態和分布
二、實驗原理
高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運動,改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的.光照,又不至于被強光灼傷。在強光下,葉綠體以其橢球體的側面朝向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆蘚,其小葉內葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。活細胞中的細胞質處于不斷的流動狀態,觀察細胞質的流動,可以用細胞質基質中的葉綠體的運動做為標志。
三、材料用具
蘚類的葉,新鮮的黑藻,顯微鏡,載玻片,蓋玻片,滴管,鑷子,刀片,培養皿,鉛筆
四、實驗過程(見書P30)
1.制作蘚類葉片的臨時裝片
2.用顯微鏡觀察葉綠體
3.制作黑藻葉片臨時裝片
4.用顯微鏡觀察細胞質流動
物理實驗報告 ·化學實驗報告 ·生物實驗報告 ·實驗報告格式 ·實驗報告模板
五、討論
1.細胞質基質中的葉綠體是否靜止不動,為什么?
2.葉綠體的形態和分布與葉綠體的功能有什么關系?
3.植物細胞的細胞質處于不斷的流動狀態,這對于活細胞完成生命活動有什么意義?
4.用鉛筆畫一個葉片細胞,標出葉綠體的大致流動方向。
生物實驗報告14
實驗日期: 年月 日
組長: 組員:
一、實驗要求
1、練習使用顯微鏡,學習規范的操作方法。
2、能夠獨立操作顯微鏡。
3、能夠將玻片標本移動到視野中央,并看到清晰的圖像。
二、實驗原理
三、材料用具
顯微鏡,寫有“上”字的玻片,動物、植物玻片標本,擦鏡紙,紗布。
四、方法與步驟
(一)取鏡和安放
1、右手握住鏡臂,左手托住鏡座
2、把顯微鏡放在實驗臺上,略偏左。安裝好目鏡和物鏡。
(二)對光
3、轉動轉換器,使低倍物鏡對準通光孔(物鏡的前端與載物臺要保持2厘米的距離)。
4、把一個較大的光圈對準通光孔。左眼注視目鏡內(右眼睜開,便于以后同時畫圖)。轉動反光鏡,使光線通過通光孔反射到鏡筒內。通過目鏡,以看到白亮的'視野。
(三)觀察
5、把所要觀察的玻片標本(也可以用印有“e”字的薄紙片制成)放在載物臺上,用壓片夾壓住,標本要正對通光孔的中心。
6、轉動粗準焦螺旋,使鏡筒緩緩下降,直到物鏡接近玻片標本為止(眼睛看著物鏡,以免物鏡碰到玻片標本)。
7、左眼向目鏡內看,同時反方向轉動粗準焦螺旋,使鏡筒緩緩上升,直到看清物像為止。再略微轉動細準焦螺旋,使看到的物像更加清晰。
注意事項:
1、實驗完畢,把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉動轉換器,把兩個物鏡偏到峽谷旁。最后把顯微鏡放進鏡箱里,
生物實驗報告15
為了加強我院醫院病原微生物實驗室的生物安全管理工作,確保實現醫院的安全目標,我院檢驗科根據xxxx省《病原微生物實驗室生物安全管理條例》的相關規定,對醫院實驗室的安全管理工作進行了自查。我們還針對涉及病原微生物菌(毒)種及樣本的人員進行了培訓,提高他們的生物安全意識,并確保他們掌握必要的生物安全知識。
一、實驗室生物安全管理工作、各項規章制度的運行情況
醫院檢驗科注重學習和遵守《病原微生物實驗室生物安全管理條例》,并定期對生物安全各項規章制度的運行情況進行檢查和整改。實驗室嚴格遵守國家標準、實驗室技術規范和操作規程,并指派專人監督檢查其落實情況。同時,詳細記錄檢查情況,并定期召開會議討論發現的問題,并及時糾正。
二、病原微生物菌(毒)種的管理及運輸
由于目前我院的相關條件存在限制,暫時無法開展病原微生物實驗室生物的檢查。為了滿足通知要求,我們積極組織相關人員學習了以下內容:嚴格管理病原微生物實驗室菌(毒)種的登記制度,一旦收到菌(毒)種后立即進行編號登記,并詳細記錄菌(毒)種的名稱、來源、特性、用途、批號、傳代日期和數量。在菌(毒)種的管理過程中,包括安全保衛制度、安全保衛措施和保管過程中的傳代、分發和使用,都需要及時進行登記,同時定期核對庫存數量。在銷毀菌(毒)種時,還需進行滅菌指示標志和滅菌效果的登記,并做好銷毀過程的記錄。
三、實驗室生物安全突發事件的處理工作
在本次自我檢查中,我們實驗室對之前制定的應急指揮和處置體系進行了修訂,以更好地滿足實際工作的需求。
當遭遇自然災害(例如地震、水災等)或設施故障時,我們制定了針對可能出現的緊急情況的處理原則和應對措施。
同時規范了菌(毒)種外溢在臺面、地面和其他表面的的處理原則、皮膚刺傷(破損)的.處理原則、離心管發生破裂的處理原則并建立了意外事故報告制度。
我們在實驗室的醒目位置貼出了一份聯系電話列表,方便大家隨時獲取相關部門的聯系方式。這份列表包括實驗負責人、實驗室工作人員、消防部門、醫院、公安機關、工程技術人員、以及水、電氣維修部門的電話號碼。
四、提高意識,加強學習
組織檢驗人員對《病原微生物實驗室生物安全管理條例》進行全面系統的學習,同時加強了實驗室的準入制度的管理,標明實驗室類型、負責人及其聯絡方式。加強了個人安全防護。
經過此次對微生物實驗室生物安全管理工作的自查,我們全體檢驗人員對該工作的重要性有了更深刻的認識。為加強管理,確保實驗室工作的安全,我們采取了有效措施。
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