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微生物的染色實驗課堂報告

時間:2022-07-03 23:16:26 生物/化工/環保/能源 我要投稿
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微生物的染色實驗課堂報告范文

  一、實驗題目:

微生物的染色實驗課堂報告范文

  微生物的革蘭氏染色

  二、實驗目的:

  1、學習并初步掌握革蘭氏染色法;

  2、了解革蘭氏染色的原理;

  3、鞏固顯微鏡的使用。

  三、實驗原理:

  革蘭氏染色是1884年丹麥病理學家Christain Gram氏創立的,是細菌學中最重要的鑒別染色法。染色步驟分為四個部分:

  1、初染:加入堿性染料結晶紫固定細菌圖片;

  2、媒染:加入碘液,碘與結晶紫形成一種不溶于水的復合物;

  3、脫色:利用有機溶劑乙醇或丙酮進行脫色;

  G-和G+細胞壁的比較:

  1、陽性(G+)菌細胞壁特點:細胞壁厚,只有一層,主要由肽聚糖構成,肽聚糖含量高,結構緊密,脂類含量低。當乙醇脫色時,細胞壁肽聚糖層孔徑變小,通透性降低,結晶紫和碘的復合物被保留在細胞壁內,復染后仍顯紫色(如芽孢桿菌)。

  2、陰性(G-)菌細胞壁特點:細胞壁薄,由兩層構成,內壁層和外壁層,細胞壁中脂類中脂類物質含量較高,肽聚糖含量較低,網狀結構交聯程度低,乙醇脫色時溶解了脂類物質,通透性增強,結晶紫與碘的復合物易被乙醇抽提出來,因此,革蘭氏陰性菌細胞被脫色,當復染時,脫掉紫色的細胞的細胞壁又著上紅色(例如大腸桿菌)。

  四、實驗器材:

  1、菌種:大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌。

  2、溶液和試劑:革蘭氏染液、草酸銨結晶紫染液、碘液、95%乙醇、番紅復染液、水。

  3、儀器及其他用品:酒精燈、載玻片、顯微鏡、接種環、試管架、濾紙、滴管。

  五、實驗步驟

  1、取一個載玻片,將其洗凈并沿一個方向擦拭干凈,直至液體不再其上收縮為止;將接種環整平,用灼燒過的接種環在混勻的菌種中取菌,按常規方法圖片,應涂大,不宜過厚。

  2、打開酒精燈,用火焰固定,不宜烤得太狠,否則菌種呈假陽性。

  3、輕旋結晶紫染液滴管,將其旋出,滴加1滴草酸銨結晶紫染液覆蓋涂菌部位(輕晃使其完全覆蓋),染色40s。

  4、染色完成后傾去染液,水洗至流出水為無色。

  5、將玻片上殘留水用濾紙吸去,待其干燥。

  6、在涂菌部位滴加碘液,覆蓋1min。

  7、媒染完成后,傾去碘液,水洗至流出水無色。

  8、將玻片上殘留水用濾紙吸去,待其干燥。

  9、將載玻片放在白色筆記本上,用滴管滴加95%乙醇脫色,脫色30~40s,不宜脫色太狠,否則菌種呈假陰性。

  10、脫色完成后立即用水洗去乙醇。

  11、將玻片上殘留水用濾紙吸去,待其干燥。

  12、滴加番紅復染液,染色4min。

  13、染色完成后,水洗至流出水無色。

  14、吸去殘留水并晾干。

  15、用顯微鏡觀察并繪圖。

  用以上步驟完成:大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的混合圖片染色、大腸桿菌單獨菌種染色、金黃色葡萄球菌單獨菌種染色。

  六、注意事項:

  1、選用活躍生長期菌種染色,老齡的革蘭氏陽性細菌會被染成紅色而造成假陰性。

  2、圖片不宜過厚,以免脫色不完全造成假陽性。

  3、脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵,脫色不夠造成假陽性,脫色過度造成假陰性。

  七、實驗結果與討論:

  1、結果:

  繪出高倍鏡下觀察的菌體圖像。

  2、思考題:

  (1)寫出常見的革蘭氏陽性菌與陰性菌,包括致病菌。

  (2)革蘭氏染色的原理是什么?印象因素有哪些?

  (3)如何驗證你的染色結果是否正確?

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